Цепная реакция. как работают тесты на коронавирус?

Метод ПЦР

ПЦР — это метод полимеразной цепной реакции. О нем наслышаны многие, хотя до эпидемии значение аббревиатуры ПЦР было знакомо лишь криминалистам, генетикам, а также лабораторным работникам, определяющим ВИЧ, сифилис, гепатиты, туберкулез и еще ряд заболеваний.

Как работает ПЦР и какие бывают вирусы

ДНК — это двойная спираль, кодирующая генетическую информацию, в том числе, вирусов. Обе части ДНК соединены по принципу комплементарности. То есть, один элемент может соединяться только с соответствующим ему. Например, гуанин (G) только с цитозином(C). ДНК-содержащие вирусы — это вирус герпеса, оспы, гепатита В. Коронавирус относится к РНК-содержащим вирусам.

Для исследования методом ПЦР берется мазок из ротоглотки. Если в материал для анализа попала вирусная частица, то в лаборатории одна нить ее РНК достраивается до двойной спирали ДНК.

РИА Новости/Сергей Пивоваров

В чем суть метода ПЦР?

Вместо того, чтобы искать иголку в стоге сена (одну нить вирусной частицы), можно сделать целый «клубок» нитей, найти которые не составит труда. Нуклеотидная последовательность («буквы») РНК вируса уже расшифрована. И к этим «буквам» по принципу комплиментарности присоединяются в результате химической реакции другие. В итоге получается молекула ДНК. Она служит матрицей. Затем ее многократно размножают примерно по той же технологии. ДНК помещают в раствор со специальным набором химических веществ в устройство-амплификатор, в котором периодически меняется температура от 50 до 92 градусов. В нем, как в ксероксе, ДНК копируется.

Финальный этап исследования – электрофорез, на нем можно увидеть размноженные копии ДНК. ДНК заряжена отрицательно, и в электрическом поле ее притягивает положительный заряд. Притягиваясь к нему, размноженная ДНК проходит через краситель. Чем больше фрагмент ДНК, тем медленнее он двигается и тем ярче окрашивается.

Если в биоматериале пациента не было вирусной частицы, то и первая цепочка ДНК не выстроится – химическим веществам, подобранным для строительства, не за что будет «зацепиться». Соответственно, форез ничего не покажет.

Иммуноглобулины класса А (IgA)

Иммуноглобулины А (составляют около 15% всех сывороточных Ig) определяют иммунологическую резистентность (защиту) всех слизистых, где они и секретируются (вырабатываются слизистыми ЖКТ, урогенитального и респираторного трактов). Антитела данного типа ближе других находятся к внешней среде, поэтому первыми берут на себя защиту организма от воздействия токсинов и различных патогенных веществ.

Цепная реакция. как работают тесты на коронавирус?

Огромное количество антител класса А содержится в грудном молоке, которое восполняет недостаток иммуноглобулинов в организме новорожденного и, таким образом, защищает малыша от многих неблагоприятных факторов. Много IgA в слюне (для обезвреживания попадающих в организм микробов и вирусов), в слизистой шейки матки (слизистая пробка), то есть, они являются надежным барьером, предотвращающим проникновение на наши слизистые болезнетворных микроорганизмов. Дефицит этих антител в местах продукции неизбежно приводит к снижению местного иммунитета и инфицированию. Повышенные антитела класса А имеют диагностическое значение в определении TORCH-инфекций и некоторых ИППП:

  • При заражении Toxoplasma gondii (токсоплазмоз), как всегда, первенство принадлежит иммуноглобулинам класса М (Тохо-IgМ), они появляются приблизительно через неделю после инфицирования, а специфические IgA начинают обнаруживаться спустя 2 недели после проникновения возбудителя, и через месяц их уровень достигает максимума. Однако Тохо-IgA в течение последующих полгода в большинстве случаев (90%) исчезают. Очень редко АТ класса А к токсоплазмозу сохраняются до года, поэтому их вряд ли целесообразно считать основным критерием первичного инфицирования (как и Тохо-IgМ), хотя они и позволяют предполагать, что давность заражения может ограничиваться 12 месяцами. Между тем, с учетом того, что IgA не способны преодолевать трансплацентарный барьер, Тохо-IgA могут стать помощниками в диагностике внутриутробной инфекции при врожденном токсоплазмозе (решающая роль принадлежит клиническим данным, акушерскому анамнезу, определению ДНК toxoplasma методом ПЦР). Более точной информативностью в отношении сроков заражения токсоплазмозом и длительности заболевания обладают антитела класса G, а именно, индекс их авидности, свидетельствующий о прочности связи между антителом и антигеном.
  • Неудивительно, что попав на слизистую половых путей и начав свое развитие, хламидия вызывает усиленную выработку иммуноглобулинов класса А, которые на первом этапе пытаются сами справиться с нашествием непрошенных «гостей». Повышенный титр АТ к хламидиям обнаруживается уже через 1,5-2 недели после попадания возбудителя и продолжает расти несколько месяцев. Если процесс своевременно не остановить активным лечением, то он перейдет в хроническую форму, чтобы в последующем дать обострение с повышением уровня IgA. Следует заметить, что лабораторный поиск хламидий основан на проведении полимеразной цепной реакции (ПЦР), а анализ на антитела является лишь дополнением к диагностическим мероприятиям.

Когда делают экспресс-тест?

Целесообразно проводить «быстрый» тест не ранее 7 дней от начала заболевания. Именно в острой стадии, которая обычно наступает на 7-10 день, наиболее активно вырабатывается иммуноглобулин класса М.

Затем наступает стадия, когда активность иммуноглобулина IgM снижается и вырабатывается иммуноглобулин IgG. Это говорит о том, что сформировались антитела к перенесенной вирусной инфекции, выработался определенный иммунитет.

Если анализ не показал наличие специфического иммуноглобулина, то можно делать вывод о том, что либо анализ проведен слишком рано, либо человек не переболел.

Результаты теста

Ни один из используемых сегодня методов тестирования на COVID‑19 не может дать 100% точного результата. Действия медицинского персонала при получении ответа зависят от того, какое заключение выдала лаборатория.

Положительный

В случае положительного результата исследования на коронавирус:

  1. Пациента и руководителя медицинской организации уведомляют о результате анализа.
  2. Устанавливаются плановые даты повторного забора материала на исследование ( 3 и 11 день от даты первого забора).
  3. Производится опрос пациента о его состоянии и принимается решение о домашнем карантине или помещении в специализированный стационар.
  4. Определяется круг контактов с пациентов, при наличии у них симптомов простуды или гриппа проводится забор материала для тестирования на коронавирус.

Отрицательный

Результаты теста могут быть искажены на фоне приема антивирусных препаратов. Отрицательным может быть тест и у лица, только что заразившегося, когда вирус еще не проник дальше слизистых.

Результат может быть ложноотрицательным и рекомендуется сделать его повторно через 4 дня от забора материала на первый тест.

Справка об отсутствии коронавируса

Тест на антитела

Анализ на антитела к коронавирусу проводится путем забора крови. В ней обнаруживаются специфические антитела, вырабатываемые организмом в ответ на проникновение инфекции Sars-CoV-2. Самыми популярными являются тесты, определяющие иммуноглобулины класса G как наиболее информативные.

Антитела IqG, обнаруженные в сыворотке крови, покажут, болел ли человек коронавирусом, и есть ли у него специфический иммунитет. Это особенно актуально при подозрении на то, что болезнь была, но протекала без каких-либо симптомов.

Для определения антител производится забор крови из вены

Специальной подготовки к тесту на коронавирус, определяющему наличие антител в крови, не требуется. Но общие правила все же существуют. Особой диеты соблюдать не нужно, питаться можно как обычно, но исключить употребление алкоголя минимум за сутки до сдачи.

Анализ на Covid-19 сдается натощак, через 12 часов после последнего приема пищи. Пить разрешается без ограничений. За 12-14 часов до процедуры желательно отказаться от курения, высокой физической активности и избегать сильных волнений.

В крайних случаях допускается сдача теста через 4-6 часов после еды, а также не ранее, чем через 30 минут после физических и нервных нагрузок, курения. Кроме того, рекомендуется прекратить прием лекарств, по возможности.

Результаты теста на антитела к коронавирусу будут готовы через 2-3 дня. Сдавать его можно в государственной и частной клинике. Но выбор, как и в случае с ПЦР-тестом, зависит от состояния пациента.

По состоянию на середину июня в Москве анализы на антитела к Covid-19 выполняют уже в 30 поликлиниках. Там есть мощная аппаратура, с помощью которой кровь проверяется иммуноферментным (ИФА) методом.

В настоящее время достаточно одного анализа, чтобы подтвердить либо опровергнуть предварительный диагноз, – он проводится методом ИФА

В его основе лежит специфическая реакция антиген-антитело. По результатам ИФА-анализа можно определить не только инфицированного человека, но и того, кто уже перенес инфекцию и получил к ней иммунитет.

Как сделать экспресс-тест на коронавирус?

Тесты на выявление антител IgM и IgG позволяют определить их по капле крови пациента. При этом не требуется специального этапа подготовки, никаких противопоказаний к проведению анализа нет.

Инструкция техники проведения экспресс-теста на антитела к Covid-19 дома:

  1. Хорошо обработайте палец спиртовым раствором, раствор на пальце должен полностью высохнуть.
  1. С помощью специального устройства сделайте прокол в области подушечки кончика пальца (2-3 мм от выпуклой части).
  1. С помощью пипетки соберите 1 каплю крови.
  1. Добавьте каплю крови в пробирку с реагентом.
  1. Закройте пробирку и в течении 3 сек. потрясите.
  1. Пипеткой наберите полученный раствор.
  1. Добавьте раствор на тест окно и ждите результат в течении 10-15 минут.

Когда проявятся полоски, зафиксируйте результат, так как через 30 минут он может исчезнуть.

Российский производитель экспресс-тестов утверждает, что чувствительность выявления антител к коронавирусу будет сопоставима с точностью диагностики методом ИФА.

Какой должен быть тест

Тесты на наличие инфекции должны обладать тремя качествами: высокой скоростью обнаружения, высокой чувствительностью и специфичностью.

Скорость обнаружения нужна для быстрого исследования. Получать результат в разгар болезни — потерять время на лечение.

Чувствительность определяет количество истинно больных лиц в обследуемой группе. Чем выше чувствительность, тем выше ценность отрицательного результата, т.е. возрастает уверенность в том, что отрицательные результаты можно обнаружить только среди здоровых лиц.

Специфичность определяется количеством истинно здоровых лиц в обследуемой группе. Чем выше специфичность, тем выше ценность положительного результата. Т.е. тем выше уверенность в том, что положительный результат обнаруживают только у больных.

Наибольшую ценность имеют тесты, обладающие одновременно и высокой чувствительностью, и высокой специфичностью. Однако такое соотношение достаточно редко, и попытки повысить специфичность обычно ведут к снижению чувствительности, а увеличение чувствительности влечёт за собой снижение специфичности.

admin
Оцените автора
( Пока оценок нет )
Добавить комментарий