Анализ пцр на впч: что это такое, как подготовиться и сдавать

ДНК анализ на ВПЧ – определение вируса по фрагментам генного материала. Амплификация мишени и сигнала

При проведении ДНК-исследования возбудителей обнаруживают по фрагментам их ДНК. Это дает возможность выявлять папилломавирусную инфекцию даже при небольшой концентрации патогенных микроорганизмов. Поэтому исследование диагностирует заражение на самой ранней стадии.

Для выявления ВПЧ берутся соскобы:

  • С шейки матки и проходящего в ней цервикального канала.
  • Со слизистой заднего свода влагалища, расположенного внизу под шейкой матки.
  • Из мочеиспускательного канала – уретры. Соскоб берется при подозрении на предраковые и онкологические заболевания мочевыделительной системы. Такой анализ на ВПЧ лучше всего сдать мужчине, но проводят его и женщинам.
  • При подозрении на предрак и рак прямой кишки. Соскоб берется со слизистой кишечника.

Соскоб на ВПЧ берут с помощью зонда или цитощетки. Затем нижнюю часть приспособления вместе со взятым материалом отделяют, помещают в транспортировочный раствор и доставляют в лабораторию. В лабораторных условиях проводятся различные исследования на папилломавирус.

Наиболее часто проводятся следующие варианты ДНК-диагностики:

  • Исследование на ВПЧ штаммы 16-18, чаще всего вызывающие рак. Рекомендуется в качестве скрининга.
  • Комплексные исследования, выявляющие сразу несколько штаммов вируса. Исследование назначают при изменениях тканей шейки матки, наружных половых органов и аногенитальной области, которые, возможно, вызваны этими возбудителями.
  • Лабораторные исследования ВПЧ низкого онкогенного риска проводятся при обнаружении бородавок и других поражений кожи, подозрительных на папилломавирусную инфекцию.

В лаборатории полученный материал промывают, убирают примеси, а затем из него выделяют ДНК возбудителей. Поскольку полученное количество генетического материала недостаточно для исследования, его объем увеличивают – aмплифицируют. Для этого проводится репликация – копирование фрагментов ДНК. Процесс проводится до тех пор, пока не удаётся получить количество материала, необходимого для лабораторного исследования.

На таком методе, называемом амплификацией мишени, основана ПЦР-диагностика (полимеразная цепная реакция). Этот современный высокоинформативный метод выявляет разнообразные штаммы.

ДНК вируса соединяют с реактивами, вступающими с ним в реакцию. Получившиеся вещества называют гибридами. С помощью лабораторных методов определяют штаммы ВПЧ, на которые среагировали реактивы при получении гибридных соединений.

Современные реактивы представляют собой смесь веществ, вступающих в реакцию с ДНК, принадлежащих различным вирусным штаммам. Это дает возможность определить за одно исследование несколько типов ВПЧ.

Каждое из используемых веществ «подстроено» под конкретный вид папилломавируса и не реагирует на другие. Это исключает ложноположительную реакцию и позволяет достичь высокой точности.

Существует другая методика проведения ДНК-диагностики, называемая амплификацией сигнала, Digene-тестом, Digene Hybrid Capture II, двойной генной ловушкой. Для ее проведения взятые образцы смешивают с раствором, разрушающим вирус и освобождающим его ДНК. Обработанный препарат смешивается с реактивами с образованием соединений-гибридов. Этот этап – гибридный захват или гибридная ловушка, дал название методике.

Анализ пцр на впч: что это такое, как подготовиться и сдавать
ДНК диагностика

Гибриды отделяют и смешивают с реактивами, заставляющими их светиться. С помощью химических веществ и специальной аппаратуры свечение усиливают, то есть происходит амплификация сигнала. Очень точные приборы, которые могут различать световые сигналы, возникающие при обнаружении конкретного возбудителя, регистрируют их, выявляя заражение тем или иным штаммом.

С помощью обоих методов можно провести качественный анализ, выявив имеющиеся типы папилломавируса и количественный, определив их концентрацию. Для количественной оценки с помощью компьютерных программ анализируются объем ДНК вирусов и сила их свечения. Чем больше генного материала было найдено в образцах, и чем раньше прибор зарегистрировал свечение гибридов, тем выше концентрация вируса.

Как проходит диагностика впч?

Анализ пцр на впч: что это такое, как подготовиться и сдавать

Диагностическое обследование начинается с опроса пациента о наличии жалоб и первичного осмотра поражённых участков тела. После чего, обратившегося человека специалист направляет на лабораторные исследования.

Женщинам дополнительно назначают пройти биопсию шейки матки и кольпоскопию

Важно знать, что данные исследования проводятся только после того, как пациентка сдала анализ крови на ВПЧ, и его результат оказался положительным

Мужчины при этом сдают анализ на полимеразную цепную реакцию.

Клинические проявления ВПЧ есть примерно у половины инфицированных, поэтому, чтобы наверное знать, есть вирус или нет, необходимо пройти проверку с помощью медицинских тестов. При этом гораздо важнее выяснить, какой именно тип ВПЧ попал в организм. Какие анализы сдают, зависит от цели исследования:

  • определить тип ВПЧ;
  • установить количество вируса;
  • оценить степень поражения клеток и т.д.

Исследование на папилломавирус надо делать не только при наличии клинических проявлений, но и при планировании беременности, чтобы защитить ребенка от заражения.

В настоящее время существует много способов лабораторной диагностики ВПЧ. Какие анализы сдавать, решает врач, оформляющий направление. При выявлении инфекции у одного из сексуальных партнеров, второй также должен пройти обследование, поскольку заражение при половых контактах происходит почти всегда.

Какие существуют анализы на ВПЧ

Все методы обнаружения папилломавируса можно разделить на несколько категорий:

  • Качественные, выявляющие наличие и типы возбудителей, но не дающие возможность узнать их концентрацию. Обнаруживают заражение даже при отсутствии симптомов. В последнее время вытесняются количественными исследованиями, дающими больше информации.
  • Количественные – показывают не только присутствие определённых типов (штаммов) ВПЧ, но и их концентрацию (вирусную нагрузку). Прекрасно подходят для скрининга, поскольку высокая концентрация папилломавируса даже при отсутствии жалоб представляет опасность и требует лечения. Многие пациенты предпочитают сдать такой анализ, справедливо считая, что это один из лучших методов диагностики ВПЧ.
  • Цитологические (клеточные) исследования, при которых исследуются мазки с шейки матки. На вирусное заражение указывают изменения в клетках, вызванные вирусом. Штамм ВПЧ такие анализы не выявляют.

Поэтому идеальным вариантом будет проведение двух вариантов диагностики, обнаруживающих тип вируса и выявляющих вызванные им клеточные изменения.

Что является основным методом диагностики соответствующих неопластических изменений?

Цитологическое исследование по Папаниколау соскоба (мазка) из цервикального канала (т.н. ПАП-тест, PAP).

Это в гинекологии одно из основополагающих скрининговых мероприятий.

Анализ пцр на впч: что это такое, как подготовиться и сдавать

Цитологические признаки ВПЧ-инфекции:

  • койлоцитоз – появление характерно измененных при действии вируса клеток-койлоцитов, имеющих одно/несколько темных объемных ядер неправильной формы и с околоядерной светлой зоной, вакуолей;
  • дискератоз – появление мелких поверхностных клеток-кератоцитов с темными ядрами и специфической цитоплазмой.

При выявлении клеточных изменений показаны:

  • кольпоскопия с одновременной реализацией тестов с уксусной кислотой и Люголя раствором;
  • гистологическое исследование – изучение образца тканей под микроскопом.

Признаком ВПЧ при кольпоскопии считаются:

  • поглощение неравномерное раствора Люголя;
  • жемчужная поверхность, белое окрашивание эпителия в тесте с уксусной кислотой (эпителий ацетобелый);
  • выросты и пр.

Для установления конкретного типа вируса используется типирование посредством ПЦР.

Цитологический анализ на ВПЧ

Для цитологического (клеточного) исследования берётся мазок с поверхности шейки матки. Обязательно захватывается стык (зона трансформации) эпителия цервикального канала и наружной поверхности шейки. Тут чаще всего возникают предраковые изменения и злокачественные опухоли.

Традиционный метод цитологического исследования называется мазком по Папаниколау. В этом случае взятый образец наносится на предметное стекло, сушиться и доставляется в лабораторию.

В Университетской клинике применяется более современная жидкостная цитология. Мазок берется разборной цитощеткой, нижняя часть которой отделяется, и вместе со взятым образцом помещается в консервирующий раствор для доставки в лабораторию.

Анализ пцр на впч: что это такое, как подготовиться и сдавать
Цитощетка

В лабораторных условиях образцы наносят на предметные стёкла, окрашивают и осматривают под микроскопом. При поражении папилломавирусом обнаруживаются измененные клеточные элементы, которых в норме быть не должно.

Патологические изменения в мазках при ВПЧ- инфекции Характеристика клеток, обнаруживаемых при ВПЧ- инфекции
Койлоциты Клетки с неправильно развитыми деформированными ядрами, окруженными зоной просветления – гало. Их окрашенная жидкая часть – цитоплазма, имеет пятнистую окраску, состоящую из скоплений частиц вируса – вирионов.
Дискератоциты Плоские плотные клетки, содержащие белок кератин, которого в норме быть не должно. Могут иметь различную степень ороговения – слабую (паракератоз), среднюю (гиперкератоз), значительную – акантоз. Все эти варианты указывают на заражение ВПЧ.
Фигуры атипичного митоза Делящиеся клетки с нарушенным процессом деления.
Атипия Неправильно развитые клетки – слишком большие или маленькие, деформированные, уродливые, имеющие неправильное строение.
Полиморфизм Клетки, происходящее из одной ткани имеют разную форму, размер и структуру.

Обнаружение неправильно развитых клеток, атипичного митоза и полиморфизма указывает на предрак, а возможно, даже на начавшееся развитие раковой опухоли. Поэтому при таком результате требуется дополнительное углубленное исследование для исключения онкологии.

Анализ ВПЧ количественный

Не всегда достаточно знать, присутствует ли ВПЧ в структурах мочеполовой системы. Даже типирование не дает полноценной информации о состоянии его здоровья.

В норме папилломавируса в урогенитальном тракте не должно быть вообще. Но и от количественных показателей многое зависит. Вирус может находиться в неактивном состоянии.

Если вирусная нагрузка минимальная, то кондиломы не появляются, а дисплазия шейки матки не прогрессирует. Но при увеличении количество вирусов происходят патологические изменения в эпителиальных клетках.

Качественный тест не показывает количества вирусов. Для получения более точных результатов используется Digene-тест. Он применяется во всем мире.Анализ пцр на впч: что это такое, как подготовиться и сдавать

В качестве материала берется мазок. Результаты выдаются в относительных единицах. Одна единица – это 100 тысяч копий ДНК в мл.

Расшифровка теста следующая:

  • при результате ниже 1,0 указывается, что вирус не обнаружен
  • если результат выше, указывается числовое значение

Если вирусная нагрузка больше единицы, это означает, что концентрация вируса клинически значимая. И чем больше это число, тем выше риски для здоровья. В ходе успешного лечения количественные показатели могут снижаться.

Количественный Digene-тест часто используется для оценки эффективности проведенной медикаментозной терапии. Он более точный, по сравнению с качественной ПЦР. Потому что сам факт обнаружения папилломавируса не всегда говорит о болезни и о возможном неблагоприятном исходе вирусоносительства.

Количественное исследование часто используется для оценки результатов терапии. В случае успеха количество вирусов должно уменьшиться. Результат обозначается как отрицательный. Или указывается число, которое меньше того, что было на момент установления диагноза. Но бывают случаи, когда вирус не исчез, а напротив, после лечения стало хуже.

Почему так происходит?

Вероятная причина – это иммунодефицит. В том числе у пациента может быть ВИЧ инфекция. Анализ пцр на впч: что это такое, как подготовиться и сдавать

Снижение иммунитета не всегда обусловлено инфекционным фактором.

Иммунная система страдает при тяжелых заболеваниях, перенесенных операциях, нездоровом образе жизни. Его угнетают некоторые препараты: иммунодепрессанты, цитостатики, глюкокортикоиды.

Само лечение затруднено из-за того, что специфические препараты против ВПЧ не разработаны. Врачам приходится использовать противовирусные средства общего действия и иммуномодуляторы. Поэтому лечение не всегда эффективно.

Но все же в большинстве случаев при правильном подходе к лечению снизить вирусную нагрузку удается. После этого прекращаются патологические процессы в мочеполовой системе.

Дисплазия больше не прогрессирует. Она также может регрессировать. С высокой вероятностью это происходит, если патологические изменения оцениваются как 1 или 2 стадия дисплазии.

Методы лечения

Для лечения ВПЧ применяют противовирусные препараты

  • Хирургический – удаление папиллом, кондилом, бородавок:
  • Лазером (лазерная деструкция/коагуляция).
  • Радиоволновым излучением.
  • Электроножом.
  • Прижигание бородавок жидким азотом (криодеструкция).
  • Применение средств, действующих локально, для некротизации патологических элементов – веррукацид, суперчистотел, подофиллотоксин 0,5%. После проведения хирургического лечения назначают противовирусные, иммуномодулирующие препараты.
  • Противовирусные препараты – Изопринозин, Виферон, Панавир, Генферон, Кипферон.
  • Укрепление иммунитета – Иммунал, Полиоксидоний, Галавит.

Противовирусные и иммуностимуляторы выпускаются в форме таблеток, свечей. Длительность курса определяется лечащим врачом, как правило, 10-14 дней, по необходимости продляется.

Возможно использование народных методов лечения после консультации с лечащим врачом. Народные методы лечения имеют 2 направления:

  1. Удаление образований. Наружно используется настойка чистотела, сок одуванчика/сырого картофеля – смазывать дважды в сутки. Папиллома отпадает примерно через 1,5-2 месяца.
  2. Укрепление иммунной системы – можно проводить на протяжении всего заболевания. Рекомендуют:
  • Отвары – еловой хвои/лука репчатого с добавлением меда.
  • Чаи – шиповник, мелисса, иван-чай, мята, липовый цвет, кориандр.
  • Сухофрукты – смесь из грецких орехов, сушеных абрикосов, изюма, лимона с медом.

Показания и противопоказания к обследованию

Вирус папилломы человека – это обобщённое название нескольких серотипов инфекции. Часть из них безобидны, другие вызывают появление на коже и слизистых бородавок и папиллом, а некоторые провоцируют онкологические заболевания, особенно у женщин.

Анализы крови и соскобов на папилломавирус позволяют выявить определенный серотип возбудителя, который вызывает рак. Высокоонкогенным видом ВПЧ считается 16-й серотип, который диагностируют у каждой второй женщины, больной онкологией шейки матки. ВПЧ высокоонкогенного риска также является 18-й серотип, верифицируемый у 10 % больных.

ВПЧ – один из самых распространённых вирусов на планете. По разным оценкам, ним инфицированы около 80 % жителей земного шара. Инфекция может передаваться несколькими путями, а именно:

  • бытовым – через контакт, предметы гигиены, полотенца, бельё, воду;
  • половым (орально-генитальный, вагинальный, анальный);
  • вертикальным – от матери к плоду при прохождении по родовым путям.

Самый распространённый путь передачи – половой, поскольку слизистый эпителий гениталий не имеет дополнительного фактора защиты – рогового слоя, поэтому он наиболее уязвим к патогенным микроорганизмам, в частности ВПЧ. После инвазии в организм возбудитель находится в двух формах: существует вне генетического материала клеток или внедряется в хромосомы, вызывая их мутации.

Анализ пцр на впч: что это такое, как подготовиться и сдавать

После попадания вируса в человеческое тело, он встраивается в ДНК клетки хозяина и вызывает сбои в алгоритме её деления. В механизме развития инфекции играют роль нарушение резистентности организма и персистирование самого ВПЧ, в результате чего отмечается рост бородавок и кондилом на слизистой гениталий или ротовой полости. Такие новообразования могут переходить в злокачественную форму.

У большинства инфицированных пациентов ВПЧ-инфекция имеет скрытое течение. Иммунная система способна сдерживать вирус довольно долго. Но под воздействием некоторых факторов он может активироваться – стресс, инфекционное заболевание, курение, алкоголь, наркотики.

Врач направит на лабораторное исследование, если обнаружит на теле признаки присутствия ВПЧ в организме. Существует ряд показаний, при которых обязательно сдается анализ для определения вируса даже при отсутствии внешних признаков. Сдать анализы необходимо в следующих случаях:

  • острые и хронические инфекции мочеполовой системы;
  • бесплодие;
  • невынашивание плода;
  • папилломавирусная инфекция у полового партнера;
  • дисплазия и эрозия эпителия шейки матки;
  • беспорядочная половая жизнь;
  • профилактический осмотр.

При планировании беременности анализ на папилломавирус надо сдать обоим партнёрам, поскольку инфекция передаётся при незащищённых половых контактах.

Направление на диагностику ВПЧ выдают такие специалисты, как врач-гинеколог, врач-уролог, врач-андролог, врач-дерматолог.

Проведение скрининга ВПЧ — виды и особенности

При этом стоит понимать, что непосредственно вирус папилломы к раку не приводит. Он может превращаться в опасный фактор только при наличии благоприятной среды, когда для разных ВПЧ высокого канцерогенного риска (ВКР) развивается такая ситуация,  что они «выстреливают» быстро. Такой вирус при этом, пока он неактивен, вполне возможно вывести, но придется потратить на это много времени.

Но не все так радушно, заражение ВПЧ иногда приводит и к развитию достаточно серьезного заболевания – рака. Предположить, как будет вести себя инфекция в организме возможно, но только зная тип папилломавируса.

Типы вируса папилломы человека

Исследования, проводимые последние десятилетия, позволили установить, что ВПЧ передается только от одного человека к другому, причем это может быть как носитель инфекции, так и пациент с выраженными клиническими признаками папилломатоза.

https://youtube.com/watch?v=56jNEjyop-8

Установлено, что папилломавирус подразделяется на типы, их насчитывается более ста. В зависимости от типа попавшего в организм вируса в дальнейшем и будут происходить все внешние и внутренние изменения.

Фото различных видов папиллом

Скрининг (от англ. screen – просеивать) в здравоохранении – это массовое обследование населения с целью выявления определенного заболевания или факторов, способствующих его развитию. Предусматривает проведение ряда специальных диагностических методик.

Общие сведения о ВПЧ

О вирусе папилломы человека (ВПЧ) узнают, что это такое, когда он уже проявил себя. На слизистой поверхности гениталий у мужчин и женщин появляются остроконечные наросты – кондиломы. Более серьёзные последствия – патологическое перерождение шейки матки – становятся известны на приёме у гинеколога.

Медикам этот вирус известен давно: он вызывает образование папиллом и бородавок. Бить тревогу врачи и учёные стали тогда, когда проследили непосредственную связь между наличием вируса в организме и развитием опухоли шейки матки. Инфекция обнаруживается практически в каждом материале биопсии.

ВПЧ широко распространён. Знакомства с ним удаётся избежать только около 20% населения планеты.

Основной путь передачи – контактный, во время интимной близости. Презервативы не защищают, но чуть снижают уровень риска передачи инфекции.

Это связано с возрастающей популярностью анального секса. Заражение и развитие вируса может произойти от инфицированной матери к младенцу в родах. У малыша появляются наросты на гортани, генитальные бородавки. Такие клинические случаи встречаются редко, но они есть. Возможен контактно-бытовой способ заражения бородавками, если кожа имеет микроповреждения.

Особенности вируса папилломы человека

При попадании ВПЧ в организм иммунная система активно и успешно подавляет инфекцию. Но может произойти сбой противовирусного иммунитета, вирус активируется. Происходит это при ослаблении защитных сил организма (беременность, курение, химиотерапия, после пересадки органа). Тогда болезнь начинает активно развиваться.

Папилломавирус передается только от человека к человеку и приводит к изменению характера роста тканей. Штаммов ПВЧ более 100 видов. Условно их разделили на следующие группы:

  • Неонкогенные папилломавирусы (HPV 1, 2, 3, 5);
  • Онкогенные папилломавирусы низкого риска (в основном HPV 6, 11, 42, 43, 44);
  • Онкогенные папилломавирусы высокого онкогенного риска (HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 и 68).

Клинические проявления ВПЧ могут быть разные: обыкновенные бородавки, папилломы, остроконечные кондиломы (на слизистой), рак шейки матки, рак вагины, рак пениса, рак прямой кишки.

Особенности сдачи анализа при развитии ВПЧ

Обычный осмотр у гинеколога, может диагностировать, только внешнее наличие кондилом. Но какова природа данного новообразования, можно с уверенностью сказать, только после сдачи специфических анализов.

Для того, чтобы обнаружить наличие ВПЧ в организме, необходимо досконально обследовать мазок или соскоб, взятый с зараженного участка. Самую достоверную и информативную базу, дают анализы ПЦР.

Но это в том случае, что все работы выполняют квалифицированные специалисты.

На плановом или внеочередном осмотре, специалист может выявить какие-либо отклонения. Что позволит ему предложить пациенту или пациентке сдать анализу, для достоверности в своих доводах. Отметим следующие предписания, которые необходимо соблюсти перед сдачей биоматериала.

Анализ пцр на впч: что это такое, как подготовиться и сдавать

За сутки, не стоит применять медикаменты местного назначения, то есть использовать, (контрацептивы, мази, свечи, спринцевания), и всевозможные гели для интимной гигиены. Применение данных лекарственных препаратов и средств может кардинально повлиять на показатели процедуры.

А неверные данные приведут к плачевным последствиям. И еще один момент, не стоит мочиться в течение 1,5-2 часов перед процедурой (это в том случае, если берут анализы из уретры).

Рекомендуем почитать:ВПЧ А9ПЦР ВПЧВПЧ 16 типа

Какие еще бывают кванты?

В медицине применяют три вида квантовых исследований. Каждый из них, выявляет наличие и количественный состав определенных штаммов. Представленные методы позволяют в реальном времени распознать определенный тип вирусной инфекции.

1. HPV Квант-4 – исследования, связанные с определением HPV 6, 11, 16, 18;
2. HPV Квант-15 – исследования, связанные с определением HPV 6, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68;
3. HPV Квант-21 – исследования, связанные с определением HPV 6, 11, 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 44, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 82.