Пцр анализ: что это такое, как проводится исследование, методы диагностики заболеваний

Каковы преимущества и недостатки ПЦР-диагностики инфекций?

Преимущества исследования:

можно изучать любой биологический материал (клетки эпителия, кровь, мочу, слюну, сперму, выделения и пр.);
выявляются следы/части собственно инфекционного агента, а не продукты его распада или ответные реакции организма;
выявление ДНК-фрагмента, соответствующего только данному конкретному возбудителю;
удается обнаруживать всего несколько клеток (желательно порядка 10 – 100 в образце);
на все исследование уходит не более 5 часов;
можно диагностировать как острые, так и хронические, и бессимптомные формы заболеваний и др.

Относительные недостатки:

не самый дешевый метод;
не позволяет установить живой или неживой возбудитель обнаружен;
обнаруженный микроорганизм не является гарантированно причиной имеющихся проблем (благодаря высокой чувствительности обнаруживаются даже минимальные, клинически незначимые количества);
возможны ложноположительные/ложноотрицательные результаты;
предъявляет высокие требования к точности соблюдения техники проведения и к квалификации персонала.

Интерпретация результатов ПЦР анализа

При определении наличия ДНК (РНК) полимеразная цепная реакция считается положительной, и это точно демонстрирует наличие возбудителя.

Для диагностики вируса иммунодефицита человека и гепатитов В и С используют ПЦР с определением концентрации ДНК (РНК).

Для ДНК высокой считается концентрация 1,0 x 105 копи на такие инфекции как герпес, цитомегаловирус, ВИЧ и гепатиты, а также токсоплазмоз.

Количественная оценка ПЦР или количественный анализ экспрессии генов говорит об их активности. В результате экспрессии генов образуются определенные белки. которые и считаются в рамках количественной ПЦР в реальном времени. По результату этого исследования врач судит об инфекционной нагрузке и активности возбудителей.

При диагностике ИППП используют несколько диагностических исследований. ПЦР позволяет довольно точно определить наличие определённого возбудителя уже в продромальный период развития инфекции.

Когда симптомы больше напоминают простуду, чем конкретное заболевание. Интересно также оценить напряженность иммунного ответа макроорганизма. Для этого назначаются серологические исследования ИФА, РПГА, РИФ и прочие.

Серология показывает, сколько антител и к какому именно антигену сформировалось, какая стадия заболевания наблюдается. Существует понятие «титр антител». То есть их количество, характеризующее напряженность, то есть выраженность иммунитета. Случается, что ответы разных исследований противоречат друг другу.

ПЦР является реакцией проверки, то есть именно по её положительному результату судят о наличии возбудителя. Например, если ПЦР положительна, а мазок на флору отрицательный.

Мы считаем, что в последнем случае в материал просто не попало нужного количества микроорганизмов. Или они не окрасились по разным причинам. Если ПЦР положительна, а серологические пробы отрицательны, то организм человека не вырабатывает иммунного ответа на возбудителя.

Наблюдается состояние иммуносупрессии, что бывает:

при ВИЧ
при приёме специальных лекарственных препаратов после трансплантации
при лечении аутоиммунных заболеваний
в период выздоровления после тяжёлой болезни
при истощении или тяжелой хронической усталости

Если ПЦР отрицательна, а серологические пробы положительны, то нужно смотреть на фракцию иммуноглобулинов. IgM характерен для острой фазы течения заболевания при первичном заражении.

В такой ситуации врач может повторить забор материала. Или ориентироваться по точному, но длительно выполняемому культуральному методу (посев культуры возбудителя на питательные среды).

Высокий титр Ig A или IgG могут свидетельствовать о хронической инфекции в стадии обострения. А их низкие титры – просто о том, что пациент перенёс данное заболевание. Именно поэтому серологические пробы не используют для контроля эффективности лечения. В частности, проводить ПЦР нужно после определенного промежутка.

Цена анализа зависит от материала, использованного для ПЦР, и колеблется от 350 до 1200 рублей.

При необходимости сдать ПЦР анализы обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.

Взятие гинекологического мазка с последующим исследованием его с помощью ПЦР открывает возможности для диагностики инфекций, передаваемых половых путём. Открыто данное исследование было в 80-х годах 20 века. Ученый, разработавший его, получил Нобелевское вознаграждение. Открытие позволяет узнавать возбудителя заболеваний при его минимальной концентрации в половых путях. Высокая точность инновационной ПЦР-диагностики делает её незаменимым исследованием во многих сложных клинических случаях.

Какие инфекции можно диагностировать методом ПЦР

На диагностику отправляют гинеколог, уролог или дерматолог. Анализ ПЦР дает возможность диагностировать большое число разнообразных инфекций. В эту группу попадают и скрытые, бессимптомные заболевания, находящиеся в инкубационном периоде:

С помощью метода ПЦР можно обнаружить:

гепатит C, B;
уреаплазмоз половых органов;
ИППП – уреаплазмоз, трихомониаз, гарднереллез,;
хламидиоз половых органов и дыхательных путей;
микоплазмоз половых органов и дыхательных путей;
бактериальный вагиноз;
кандидоз половых органов;
инфекционный мононуклеоз;
туберкулез;
сальмонеллез;
туберкулез (легочные и внелегочные формы);
листериоз, клещевые энцефалиты, болезнь Лайма;
цитомегаловирусную, папилломавирусную, герпесную инфекцию;
детские заразные болезни, выявляемые при беременности и до зачатия — краснуху, паротит, дифтерию, корь;
ВИЧ.

При каждом из вышеперечисленных заболеваний, обнаруженным другим методом, желательно делать и ПЦР — исследование. Возбудители многих инфекций имеют несколько типов (штаммов), а более точная диагностика делает лечение эффективнее. Поскольку разные типы возбудителей обладают своими способами передачи инфекции, точное определение возбудителя помогает уберечь от заражения окружающих. Например, гепатитом А можно заразиться через общие предметы и посуду (болезнь грязных рук), а гепатитом С — только через кровь, медицинские инструменты и половые контакты

Это важно для тех, кто находится рядом с больным

Какие инфекции можно выявить данным методом?

Метод ПЦР пользуется популярностью не только по той причине, что результат можно получить через 5 часов, но из-за возможности выявления сразу нескольких инфекций. ПЦР 12 какие инфекции входят:

ВИЧ – одна из самых опасных инфекций, которые есть в мире. Она входит в группу ИППП.
Гепатиты различных групп.
Вирус Эпштейн-Барра.
Инфекции, которые передаются половым путем, то есть входят в группу ИППП. В группу ИППП входят микоплазмоз, трихомониаз, хламидиоз.
Герпес первого и второго типа.
Цитомегаловирус.
Бактерии, вызывающие туберкулез.
Листериоз.
Инфекция хеликобактер пилори.
ВПЧ и его многие подвиды.
Энцефалит клещевой.
Кандидозная инфекция.

Метод ПЦР очень удобен в использовании – результат через 5 часов, тем самым он и практичный в использовании

Группа ИППП состоит из инфекций, которые передаются через половой путь. Вышеприведенный список лишь небольшая часть вирусных и бактериальных заболеваний, которые могут диагностироваться методом ПЦР.

В число заболеваний, которые выявляются при ПЦР, входит довольно много тех, что могут передаваться половым путем. Именно поэтому рассматриваемый метод применяется в нижеприведенных областях:

Онкологические исследования.
Гастроэнтерологические обследования.
Пульмонологические исследования.
Фтизиатрическая сфер медицины.

В общем, практически во всех случаях можно проводить ПЦР исследование для выявления скрытой или активной инфекции.

Мазок ПЦР

Одним из часто применяемых в гинекологии методов молекулярной диагностики является ПЦР — полимеразная цепная реакция. Суть данного метода заключается в специфичном увеличении в несколько сотен раз участка ДНК возбудителя, что помогает без труда его идентифицировать. Метод позволяет выявить скрытые инфекции в организме женщины.

Материалом для данного исследования могут служить различные биологические жидкости. Это могут быть мокрота, кровь, моча, слюна. Кроме того мазок на ПЦР берется из цервикального канала или со слизистой влагалища.

Основными показаниями для проведения мазка на ПЦР у женщин являются:

острая фаза ИППП;
подозрение на хроническую стадию ИППП;
при тяжело протекающей беременность;
установление причин бесплодия.

Нередко данный метод применяют при необходимости определения устойчивости данного вида возбудителя к антибиотикам. Кроме того, ПЦР используют для определения степени биологической чистоты крови, забранной у доноров.

Перед тем как делать мазок методом ПЦР, женщине необходимо подготовиться. Для этого нужно соблюсти определенные правила для сдачи мазка на ПЦР. Так, за месяц до взятия материалов на исследование полностью прекращают приём лекарственных препаратов, а также лечебные процедуры.

Сам забор материала проводят до менструаций или же уже через 1-4 дня после их окончания. Накануне, за 2-3 дня, женщине необходимо воздержаться от половых контактов, а при заборе материала из уретры,- не мочиться за 2 часа перед процедурой. Взятие материала на вирусы, как правило, проводят в стадии обострения.

Данный вид исследования, мазок на ПЦР, проводится при подозрении на заболевание женщины ИППП, а также ВПЧ и при беременности. Перед тем, как делать мазок методом ПЦР, проводится подготовка женщины к исследованию, по вышеописанной схеме.

Сам забор материала проводится в лабораторных условиях. Необходимо учесть, что если материалом для ПЦР служит кровь, то забор ее проводят натощак, о чем женщину предупреждают заранее.

Забранный материал помещают в пробирки, в которые затем добавляют реактивы. Результатом исследования является синтезированный участок молекулы ДНК возбудителя, по которому его и идентифицируют. Сама процедура занимает не более 5 минут, а окончательный результат известен через 2-3 дня. В соответствии с установленным возбудителем назначается лечение.

ПЦР диагностика инфекций – расшифровка

Многие женщины, получив на руки результаты анализов, любят сами их интерпретировать, сверяясь с информацией в интернете и советами знакомых. Однако, расшифровка анализа по методу ПЦР, как и любых других лабораторных исследований, должна проводиться только медиком.

Как правильно сдавать пролактин?

Пролактин – гормон, чувствительный к состоянию организма и правилам забора крови, когда дело касается исследования его уровня. Для получения точных результатов нужно ознакомиться с правилами сдачи анализа на пролактин и не забыть об их соблюдении.

Сейчас практически не осталось в гинекологии заболеваний, которые нельзя было бы выявить при помощи современных исследований. Один из таких анализов делают методом ПЦР – это огромный шаг в диагностике заболеваний, особенно ИППП.

Метод ПЦР — как делается?

Изначально метод ПЦР применялся только в научных целях, сегодня он прочно вошел в практическую медицину, чтобы помогать нам бороться с инфекциями, которые трудно выявить любым другим путем.

Когда необходим количественный ПЦР анализ

При ПЦР количественное определение требуется во многих случаях. Она дает дополнительные возможности, если сравнивать с качественным анализом.

Если после проведения ПЦР ДНК обнаружено, знать количество микроорганизмов необходимо, чтобы понять:

требуется ли пациенту лечение (при низких количественных показателях оно может не назначаться);
насколько быстро идет выздоровление (есть ли вирусологический ответ от лечения);
стоит ли продолжать терапию этими же препаратами или нужно менять схему;
болезнь находится под контролем или возникает рецидив, требующий дополнительных терапевтических мероприятий;
насколько высоким является риск осложнений (например, вероятность диспластических изменений в шейке матки при папилломавирусной инфекции).

Поговорим подробнее, при каких патологиях могут потребоваться количественные ДНК ПЦР анализы.

ПЦР — диагностика

Часто бывает, что различные по своей природе вирусы могу вызывать одинаковые симптомы заболевания. ПЦР-диагностика позволяет определить наличие возбудителя, даже при минимальном содержании его штаммов в биологическом материале, а в отдельных случаях, выявляет даже единичные клетки вирусов или бактерий. Определяется вирус, природа его появления, устанавливается сила его воздействия на организм и количество имеющихся микробов в организме. Эта информация важна для лечащего врача при выборе лекарственных препаратов и назначении методов лечения.

В настоящее время ПЦР-диагностика позволяет выявлять все известные современной медицине вирусные заболевания. В том числе даже те, которые могут годами «жить» в организме человека и не проявлять себя, ожидая наиболее комфортных условий для своей «работы». Диагностика «растущих» длительное время возбудителей особенно актуальна в гинекологии и урологии.

В медицинской лаборатории «Синэво» можно пройти ПЦР-диагностику по следующим заболеваниям:

Гепатит B и C

Проведение ПЦР-диагностики необходимо здесь в силу того, что вирус гепатитов имеет продолжительный инкубационный период (до 180 дней) и достаточно серьезные последствия, вплоть до летального исхода.

ИППП

Заболевания, передающиеся половым путем: уреплазмол половых органов, хламидиоз, трихомониаз, микоплазмоз. Коварство заключается в том, что симптомы данных заболеваний зачастую на ранних стадиях «стерты». Эта группа заболеваний опасна тем, что может вызвать у женщин бесплодие, оказывает серьезное влияние на течение беременности, увеличивает риск развития рака шейки матки. У мужчин снижается подвижность и жизнеспособность сперматозоидов, вызывая мужское бесплодие, поражается мочеиспускательный канал и развивается простатит. Увеличиваются риски заболевания генитальным герпесом, а так же ВИЧ/СПИД. Пакет 18.1 «Обследование на ИППП».

Сдать анализ рекомендуется и супругам, желающим родить здорового ребенка. Ведь только ПЦР-диагностика позволяет выявить скрытые инфекции в организме и предотвратить их проникновение в организм плода.

Герпес

Опасное и устойчивое заболевание. Зачастую болезнь не системна и протекает долгие годы в неактивном режиме. При этом возможны проявления, похожие на симптомы герпеса. Но истекают они так быстро, что не возможно точно поставить диагноз традиционным способом. Опасность герпеса в том, что он может поражать центральную нервную систему и стать причиной развития менингита и энцефалита. См. услуги ДНК вируса простого герпеса 1-го и 2-го типа (соскоб) и ДНК вируса простого герпеса 1-го и 2-го типа (кровь, качественное определение).

Тест на отцовство

Благодаря ПЦР — диагностике инфекции выявляются на начальном этапе их развития, что способствует скорейшему выздоровлению и предотвращению серьезных осложнений.

Подробную информацию по ценам и срокам выполнения анализов Вы можете получить по телефонам (для звонков с мобильных) и +375 (17) 338-88-88

Как берется анализ ПЦР

Для диагностики могут браться разные виды биоматериала. Рассмотрим особенности подготовки и проведения исследования в зависимости от этого.

Кровь. Для анализа ПЦР берется венозная кровь в вакуумную пробирку типа Vacutainer. В пробирке лаборант перемешивает кровь с антикоагулянтом. До исследования кровь в пробирке хранится при температуре +4°С.
Пациенту нужно прийти в поликлинику натощак и не курить, чтобы не исказить результаты исследования.
Моча. В специальный стерильный контейнер отбирается средняя утренняя моча в количестве 50 мл. За сутки до сдачи анализа нужно исключить половые контакты.
Слюна. Этот биоматериал в количестве 5 мл собирают в одноразовую пробирку непосредственно перед исследованием. Перед процедурой пациенту предлагается прополоскать рот физиологическим раствором.
Мазок из зева. Лаборант производит мазок с задней стенки ротоглотки, а также с миндалин, используя одноразовый аппликатор, который затем кладет в стерильный контейнер. Перед этой процедурой желательно не принимать пищу и не пить несколько часов.
Синовиальная жидкость. Специалист производит забор синовиальной жидкости (1 мл) из полости сустава одноразовым шприцом.Биоматериал помещают в стерильную пробирку Eppendorf.
Анализ на урогенитальные инфекции. У женщин и у мужчин мазки и соскобы берутся по-разному. В первом случае биоматериал может браться из уретры, цервикального канала или заднего свода влагалища. Для этого специалист использует ложку Фолькмана или универсальный зонд. Инструмент со взятым материалом помещают в одноразовую пробирку Eppendorf. Для взятия анализа из уретры у мужчин лаборант использует универсальный зонд или цитощетку. Сок предстательной железы после пальцевого массажа собирают в количестве 1 мл в стерильную пробирку. В некоторых случаях, при невозможности получения сока, после пальцевого массажа берут первую порцию мочи (10 мл).

Нужна ли подготовка

Подготовка к ПЦР-анализу на урогенитальные инфекции несложная. Женщинам нужно выбирать период до менструации или через 2 дня после ее окончания. За несколько дней исключить спринцевание, а также использование вагинальных таблеток, мазей и свечей.

Пациентам обоих полов рекомендуется:

Не жить половой жизнью сутки перед проведением исследования.
Не мочиться за 2 часа до сдачи анализа.
Не принимать антибиотики за3 недели до процедуры.
В день проведения анализа не проводить гигиенические манипуляции.

В современных клиниках пациентам предлагают готовые пакеты анализов ПЦР на инфекции, передающиеся половым путем – например, на 5 или 13 инфекций.

При проведении анализа ПЦР (как во время забора материала, так и во время транспортировки) очень важно соблюдать стерильность и необходимый температурный режим, в противном случае есть вероятность получить искаженные результаты

Анализ ПЦР: расшифровка результатов

Результат анализа по методу ПЦР бывает отрицательным или положительным. Отрицательный результат означает, что пациент здоров, возбудителя заболеваний в его организме не обнаружено.

Положительный ПЦР-тест говорит о наличии инфекции, которая требует лечения.

Иногда бывает так, что анализ положительный, но человек не замечает никаких отклонений в работе своего организма. Это бывает при ранних формах заболевания, о котором он может еще не подозревать. В таких случаях есть возможность начать лечить недуг на ранней стадии и имеется больше шансов его полностью победить.

Разновидности ПЦР-анализов

Вариаций такой ПЦР диагностики существует много. Выбор определенного метода зависит от многих факторов: предположительного диагноза, возможностей доступных лабораторий, метода взятия материала и пр.

Наиболее часто используются такие разновидности ПЦР:

вложенная;
ступенчатая;
с горячим стартом;
виртуальная;
ассиметричная;
в реальном времени и т. д.

Преимущественно используют ПЦР в реальном времени, так как способ характеризуется самыми точными результатами и максимальной скоростью обработки данных. После его применения заключение готово через час-два.

Если врач выдает направление на обследование с применением полимеразной цепной реакции, то он должен уточнить, какой именно биоматериал необходимо предоставить пациенту и каким образом подготовиться к отбору пробы.

Анализ крови

Кровь в качестве биоматериала для тестирования берут при подозрении на ВИЧ, вирусный гепатит, токсоплазмы, половой герпес и цитомегалию. Для большинства этих патогенов до использования этого метода диагностика базировалась на выявлении антител к возбудителю, что сильно затягивало время обнаружения микробов в тот период, когда антитела еще не вырабатываются.

Перед сдачей крови для диагностики в данном случае не нужны особые приготовления, но лучше, если проба будет отобрана натощак. Единственное обстоятельство, способное серьезно исказить результаты — прием антибиотиков, поэтому сдаче должен предшествовать временной отрезок после приема подобных лекарств в несколько дней или недель в зависимости от типа антибиотика.

В самых современных клиниках в последнее время для отбора крови на ПЦР используют вакуумные системы, которые минимально повреждают кожные покровы и сводят к минимуму вероятность попадания в пробу загрязняющих агентов из воздуха, инструментов или рук лаборантов.

Анализ мазка

Используется как в гинекологии, так и в венерологии для определения заболеваний, передающихся половым путем. Часто назначают ПЦР мазка во время беременности для выявления скрытых факторов, способных негативно повлиять на формирование плода или ход беременности.

Подготовка к отбору материала заключается в том, чтобы полностью исключить половые контакты за несколько суток до процедуры. Проводить спринцевания марганцовкой или настоями трав тоже нельзя. На протяжении критических дней и 2-х дней после них мазок на ПЦР-анализ не берется.

Отбор биоматериала производят в лаборатории из влагалища, шейки матки, цервикального канала или уретры.

ПЦР-анализ мазка позволяет выявить патоген, который устойчив к определенному виду антибиотиков. Кроме того, показаниями к такому виду диагностического обследования выступают:

осложненная беременность без видимых причин;
острое течение венерической болезни;
предположительное хроническое течение венерического заболевания;
выявление причин бесплодия или самопроизвольных абортов.

Анализ кала

Анализ кала с применением полимеразной цепной реакции назначается специалистом для уточнения наличия инфекции. Подготовка к отбору пробы кала для ПЦР заключается в следующем:

исключить за несколько суток слабительные средства в виде любых свечей, масел или оральных медикаментов;
не употреблять накануне лекарства или продукты, которые придают калу выраженную окраску.

Материал для ПЦР-определения лучше всего доставить в специальном контейнере для кала с палочкой. Внутреннее пространство контейнера стерильно, поэтому протирать или промывать его не следует

Во время отбора образца важно отслеживать, чтобы не задеть внутреннюю поверхность приемника, также в пробе не должно быть следов мочи. Перед отбором запрещено применение клизм

Анализ мочи

Такое исследование с помощью ПЦР позволяет извлечь ДНК образец вируса или бактерии. Забор мочи лучше проводить утром натощак. Лучше всего, если это будет происходить непосредственно в лаборатории.

Обязательные условия подготовки для получения результатов исследования мочи в лаборатории полимеразной цепной реакции:

выдержать 3 недели после приема антибиотиков;
перед отбором жидкости не пить и не есть;
запрет вагинального секса за сутки до сдачи пробы;
в контейнер нужно поместить первую порцию материала после пробуждения.

Достоинства и недостатки метода ПЦР

Современные методы позволяют точно подобрать набор веществ, нужных для реакции, а значит, «достроить» именно ДНК SARS-Cov-2, а не другого похожего.

Теперь о недостатках. Первое — относительно высокая цена. Она обусловлена высокой себестоимостью как праймеров, так и оборудования – амплификаторов. Второе — время. Ждать, пока размножится ДНК, нужно несколько часов, а с учетом транспортировки до лаборатории результаты теста пациент может узнать через сутки и более.

Также эффективность теста не превышает 80%. Праймеры для реакции подбираются на основе информации об РНК вируса. Но фрагмент с теми же «буквами» может оказаться и в других микроорганизмах пробы – отсюда ложноположительный результат. Ложноотрицательный результат получится, если вирусные частицы ушли из ротоглотки, спустились дальше по дыхательному пути. Тогда в пробе просто не окажется РНК вируса.

Сдавать тест ПЦР есть смысл в том случае, если человек контактировал с пациентом с подтвержденным коронавирусом.

Показания к ПЦР

ПЦР на половые инфекции выполняются пациентам, которые:

жалуются на симптомы со стороны урогенитального тракта;
вступали в половые контакты с потенциальным или установленным источником венерических инфекций;
желают обследоваться с профилактической целью (для раннего выявления и лечения венерических заболеваний до возникновения осложнений);
обследуются по поводу бесплодия;
планируют лечение бесплодия, в частности с использованием вспомогательных репродуктивных технологий;
планируют операции на репродуктивных органах (все венерические болезни должны быть выявлены и пролечены для снижения риска инфекционных осложнений).

Как мы уже выяснили, ПЦР выполняется не только для первичной диагностики.

Поэтому показаниями для получения результатов этого исследования также являются:

прохождение курса терапии по поводу венерического заболевания;
ВИЧ-позитивный статус (исследования проводятся регулярно для оценки последствий заболевания, особенностей его течения, назначения и коррекции антиретровирусной терапии);
наличие папиллом на половых органах (для оценки риска рака);
выявление ЗППП другими методами, например с помощью микроскопии или бак посева (показано обследование методом ПЦР на сопутствующие инфекции).

Нередко ПЦР делают пациентам в случае неудач в лечении тех или иных заболеваний.

Например, если терапия кандидоза не приносит успеха, необходимо исследование для определения вида грибка.

Исходя из этой информации, врач сможет подобрать более эффективную схему медикаментозной терапии.

Показания для анализа

Инфицирование ВПЧ возможно только при непосредственном контакте с зараженным человеком. Вирус попадает в кровь и начинает размножение в области верхних слоев кожи, что обусловливает появление его характерных признаков – возникновение папиллом и кондилом. ВПЧ распространяется следующими путями:

при незащищенных половых контактах;
при естественных родах от инфицированной матери к ребенку;
контактно-бытовым путем через предметы общего пользования, личные вещи, одежду и т.д.;
во время тесного контакта с кожей больного.

Чаще всего диагностировать ВПЧ приходят люди, у которых видны внешние признаки болезни. Однако если они никак не проявляются, это не является гарантией отсутствия вируса. Он также может присутствовать в крови и развиваться бессимптомно. Это особенно характерно для высокоонкогенных типов вируса: 16 и 18 штамма, которые провоцируют возникновение рака. Направление на диагностику этих типов обычно происходит при обращении к профильным специалистам: гинекологу и урологу.

Аналитический этап ПЦР диагностики

В лаборатории сперва выделяется ДНК из предоставленного образца.

Далее материал помещается в термостат в микроцентрифужных пробирках с добавлением амплификационной смеси на несколько часов.
Для сравнения выполняется контроль с известными ДНК определенных микроорганизмов. Выполняется электрофорез со смесью бромистого этидия и ДНК, что вызывает свечение в ультрафиолетовых лучах.

Электрофорез позволяет разделить продукты амплификации. При положительном результате теста они дают оранжевое свечение в коротком участке светового спектра.

Особенности ПЦР диагностики

Проявляемая анализом высокая чувствительность к половым инфекциям позволяет работать методикой при разных видах возбудителей.

Лучше всего выявляются уреаплазмы, микоплазмы, хламидии, а также вирусы папилломы, герпеса, гепатитов, ВИЧ, цитомегаловирус.

Есть возможность применить диагностическую тактику сразу после заражения.

В ходе исследования амплификатор периодически нагревает и охлаждает образцы с добавленными ферментами-ускорителями в пробирках.

На первом этапе расщепляют двойную цепочку ДНК искомого возбудителя.

Затем на ее короткий участок садятся два праймера (затравки) из стандартного набора, уникальные для данного возбудителя.

Для образования гибрида между матричной ДНК и праймером требуется повысить температуру.

После этого происходит удвоение участков ДНК инфекционного агента и их выделение электрофорезом и выявление.

В дальнейшем участок можно изучать и типировать.

Методика незаменима в ситуациях, когда возбудители не поддаются культуральному выращиванию, ускользают от серодиагностики.

Цена мазка и крови может несколько отличаться в разных клиниках и лабораториях.

Целесообразно, чтобы забор материала проводился в клинике, оснащенной лабораторными мощностями.

Это позволяет ограничить загрязнение образцов посторонними микробными примесями.

В чем преимущество данного метода?

Диагностика этим методом позволяет найти возбудителя непосредственно в гене, который содержится в исследуемых материалах. Это самый точный анализ на половые инфекции, скрытые инфекции, различные венерические заболевания.

Отличия ПЦР-диагностики от других методов лабораторного исследования заключаются в следующем:

метод нацелен на выявление самого возбудителя;
диагностика методом ПЦР отличается универсальностью: для обнаружения возбудителей нескольких;
заболеваний достаточно только одного биологического образца больного;
метод обладает высокой чувствительностью и не сопровождается другими перекрестными реакциями.

Кроме этого, преимуществом ПЦР-диагностики является то, что для анализа пригоден любой биологический материал пациента: кровь, выделения из половых органов, моча, сперма.

Пцр-анализ: что это такое, когда он назначается и как проводится